Extracción ADN de Tomate

EXTRACCIÓN DE ADN DE TOMATE

Introducción Teórica.

El ADN es una molécula de gran tamaño que guarda y transmite de generación en generación toda la información necesaria para el desarrollo de todas las funciones biológicas de un organismo; éste esta formado por la unión de dos cadenas, que cada cadena está formada por 4 diferentes nucleótidos.

El ADN (Ácido Desoxirribonucleico) almacena a largo plazo la información para construir otros componentes de las células como proteínas o moléculas de ARN (Ácido Ribonucleico)

Cuando el ADN se replica, se enrrolla alrededor de la proteína para formar cromosomas; los seres humanos tenemos un total de 46 cromosomas, es decir, 23 pares de cromosomas; cada par de cromosomas tiene la información de determinados caracteres y además está formado por un cromosoma del padre y un cromosoma de la madre.

Para que el ADN pueda ser utilizado debe copiarse en unos nucleótidos más cortos, es decir, en el ARN el cual está formado por una ribosa, un fosfato y una de las cuatro bases nitrogenadas (adenina, guanina, citosina y uracilo.)

El ADN (en células eucariotas) se encuentra situado dentro de un núcleo que separa y protege el ADN del resto de los orgánulos.

La formación del ADN está formada por 4 fases, que son:

1. Profase: Se condensa el ADN y se rompe la membrana nuclear.
2. Metafase: Los cromosomas se colocan en el eje central.
3. Anafase: Las cromátidas de cada cromosoma se separan gracias a los hilos del huso mitótico
4. Telofase: Se forman nuevas membranas y el ADN se condensa en cada una de las células hijas.

Material Necesario.

• Hoja de tomate.
• Tubos cónicos.
• Gradilla.
• Rotulador permanente.
• Pipeta de capacidad 200mL.
• Pipeta de capacidad 500mL.
• Incubadora.
• Centrifugadora.
• Palillo de madera.
• Vaso de plástico.
• SDS.

Hipótesis.

Se va a intentar extraer y visualizar el ADN de una hoja de tomate, la cual la podremos observar como una minúscula masa de color blanquecino siempre y cuando hayamos realizado la práctica correctamente.

Objetivos.

Extraer al ADN de la hoja del tomate y aprender a utilizar todo este nuevo material de laboratorio y sus métodos de experimentación.

Método de experimentación.

1. Con el rotulador marcamos cada tubo con su nombre.
2. Cortamos un trozo de la hoja del tomate y la introducimos en cada tubo.
3. Añadimos 250 mL de tampón de extracción.
4. Se tritura con el palillo de madera hasta que no queden restos de la hoja.
5. Añadimos otros 250 mL de tampón de extracción.
6. Añadimos 35 mL de SDS y agitamos suavemente para no crear demasiada espuma.
7. Ponemos el tubo a incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos.
8. Añadimos 130 mL de acetato potásico 5M.
9. Centrifugamos los tubos durante 10 minutos a 13.000 rpm.
10. Pasamos el sobrenadante (500ml) a un tubo limpio intentando arrastrar los restos.
11. Añadimos 500 mL de isopropanol y 60 mL de AcNa.
12. Lo incubamos a temperatura ambiente 10 minutos y ahora centrifugamos durante otros 10 minutos a 12.500 rpm.
13. Ahora eliminamos el sobrenadante.
14. Añadimos 300 mL de etanol al 70% y golpeamos el tubo de extracción.
15. Por último centrifugamos de nuevo durante 5 minutos a 12.500 rpm.

Obtención de resultados.

Finalmete hemos obtenido el ADN con una forma de una pequeña masa blanca.

Análisis de los resultados.

Tras realizar esta práctica y analizar los resultados hemos obtenido una muestra del ADN de tomate, que es la masa blanca que hemos obtenido

Ambas fotografías realizadas por Víctor Amorós.

Conclusiones.

Después de haber sometido la hoja de un tomate por diferentes procesos finalmente hemos podido observar su ADN.

Errores de la práctica.

El material no estaba esterilizado, durante esta práctica no utilizamos guantes ni bata y el tiempo fue demasiado justo.

Confirmación o rechazo de la hipótesis.

Nuestra hipótesis queda confirmada ya que si hemos podido observar el ADN de tomate.